BD 流式细胞仪在实验前的准备工作

　　BD 流式细胞仪是集激光技术、电子物理、光电测量、计算机及细胞荧光化学技术于一体的多参数细胞分析仪器，广泛应用于生命科学研究和临床诊断领域。其核心功能是通过液流系统将细胞或微粒排列成单列，依次通过激光束检测点，利用光学系统激发荧光标记物并捕获散射光与荧光信号，最终通过电子系统将光信号转换为数字信号进行多维度分析。

　　其液流系统由鞘液管、样品管和喷嘴组成，通过流体动力学聚焦使细胞悬浮液形成直径约3-10μm的稳定液柱，确保每个细胞独立通过激光检测区。光学系统采用氩离子激光器（488nm）或氪离子激光器（647nm），激发细胞表面或内部的荧光染料（如FITC、PE）。前向散射光（FSC）反映细胞体积，侧向散射光（SSC）揭示胞内颗粒结构，而荧光信号强度则对应标记抗原或核酸的浓度。光电倍增管（PMT）将光信号转换为电脉冲，经模数转换后生成FCS格式数据文件。

　　BD 流式细胞仪在实验前准备：

　　1、仪器校准与质检

　　开机预热：提前30分钟开机，使激光和检测系统稳定。

　　光路校准：使用标准荧光微球（如Flow Check或CytoGlow）调整激光延迟、灵敏度及PMT电压，确保液流居中。

　　检查背景噪声：运行缓冲液（如PBS），确保散射光和荧光通道的基线平稳，无异常信号。

　　2、样本制备

　　细胞浓度：调整细胞浓度至5×10⁵~1×10⁶cells/mL（过高易导致堵塞，过低降低检测效率）。

　　单细胞悬液：机械法（研磨）或酶消化法（如胶原酶）处理组织，过滤去除团块。

　　3、染色与孵育：

　　表面抗体：4℃避光孵育15~30分钟，PBS洗涤后重悬。

　　胞内染色：破膜剂（如BD Fix&Perm）处理后孵育胞内抗体。

　　活性染料：如PI（死细胞染色）或Calcein-AM（活细胞标记）。

　　4、对照设置：

　　空白对照：未染色的细胞用于确定荧光阈值。

　　单标对照：单个荧光标记的样本用于调整补偿（Compensation）。

　　同型对照：用于排除非特异性结合（如ISO型抗体）。