一、通道数选择:实验需求与扩展性的平衡
基础需求匹配
单通道至四通道:适用于常规基因表达分析、病原体检测(如新冠、HPV分型),例如LightCycler96的四通道设计可覆盖FAM/VIC/ROX/Cy5等常用染料组合。
五通道及以上:支持高复杂度多重PCR(如同时检测5种以上靶标),需结合仪器是否支持卡夹式光路设计(如QuantStudio™5的6通道系统,可通过扩展卡夹实现通道升级)。
未来扩展性
选择模块化通道设计(如Bio-RadCFX96的4通道系统),避免一次性投入过高成本。
优先选择兼容主流荧光染料(FAM/HEX/ROX/Cy5)的仪器,减少染料适配成本。
二、检测灵敏度:核心参数与实验场景的适配
灵敏度指标
单拷贝检测能力:如Archimed系列可检测1拷贝基因,适用于低丰度靶标(如ctDNA、病毒载量监测)。
分辨率:1.33倍至1.5倍的拷贝数差异检测能力,满足肿瘤MRD评估、基因突变筛查等高精度需求。
灵敏度优化技术
温控系统:±0.25℃的温控精度(如QuantStudio™5)可减少非特异性扩增,提升低浓度样本信号稳定性。
光学系统:采用菲涅尔透镜或高强度固态光源(如LightCycler96的白光LED),增强荧光信号采集效率。
三、选型决策树
常规实验:四通道+单拷贝灵敏度(如LightCycler96),覆盖基因表达、SNP分型。
复杂多重PCR:五通道及以上+高分辨率(如QuantStudio™5),支持肿瘤多靶标检测。
超敏检测:六通道+单拷贝灵敏度(如Archimed系列),适用于液体活检、病原体低载量监测。
结论:选型需结合实验复杂度、样本丰度及预算,优先选择通道可扩展、灵敏度可验证的仪器,并通过预实验验证实际性能。