神经干细胞利用微重力三维细胞培养系统培养方案

1. 前期准备

- 实验材料：获取神经干细胞（如从胚胎脑组织分离）、微重力模拟装置、神经干细胞专用培养基（含 B27 添加剂、EGF、bFGF 的 DMEM/F12 培养基）、多聚赖氨酸包被的培养容器、无菌器械等。

- 设备准备：与肿瘤细胞培养类似，调试赛奥维度CellSpace-3D微重力三维细胞培养系统，确保温度、气体环境适宜。

2. 细胞分离与接种

- 细胞分离：解剖获取胚胎脑组织，在无菌条件下剪碎，用胰蛋白酶消化后，通过机械吹打制成单细胞悬液，过滤去除组织块，离心收集细胞。

- 接种：将神经干细胞以 2 - 3×10⁵ 个/mL 的密度接种到微重力培养装置中，因神经干细胞易贴壁，包被多聚赖氨酸可促进贴壁。

3. 培养过程

- 每 2 - 3 天添加适量新鲜培养基，维持营养成分。观察细胞神经球形成情况，神经球直径达到一定大小时，可进行传代培养。

- 采用免疫荧光技术检测神经干细胞标志物（如 Nestin）的表达，以鉴定细胞特性。

4. 诱导分化：培养一定时间后，可更换为含血清的分化培养基，在微重力环境下诱导神经干细胞向神经元、星形胶质细胞等分化，通过免疫细胞化学检测相应细胞标志物（如 β - Tubulin III 用于神经元，GFAP 用于星形胶质细胞）评估分化效果。